| 梅雯,张成桂,自加吉,孙美涛,杨泽芳,张晓娟,熊伟.MTERF1基因真核表达载体的构建及其在C-33A细胞中的表达研究[J].井冈山大学自然版,2017,(5):29-34 |
| MTERF1基因真核表达载体的构建及其在C-33A细胞中的表达研究 |
| CONSTRUCTION OF EUKARYOTIC EXPRESSION VECTOR OF HUMAN MTERF1 AND IT'S EXPRESSION IN C-33A CELLS |
| 投稿时间：2017-06-12 修订日期：2017-08-22 |
| DOI：10.3969/j.issn.1674-8085.2017.05.007 |
| 中文关键词: 线粒体转录终止因子1 克隆 真核表达载体 人子宫颈癌C-33A细胞株 |
| 英文关键词: mitochondrial transcription termination factor 1 clone eukaryotic expression vector human cervical cancer C-33A cell |
| 基金项目:国家自然科学基金项目（81560458，31601155）；云南省中青年学术与技术带头人后备人才项目（第十九批）；云南省教育厅科学研究基金重点项目（2014Z126，2016ZDX101，2016ZDX105）；大理大学大学生创新创业训练计划项目（CXCY-X-2016-18）；大理大学大学生科研基金项目（201609） |
| 作者 | 单位 | | 梅雯 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000 | | 张成桂 | 云南省昆虫生物医药研发重点实验室, 云南, 大理 671000 | | 自加吉 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000 | | 孙美涛 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000 | | 杨泽芳 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000 | | 张晓娟 | 大理市第一人民医院呼吸内科, 云南, 大理 671000 | | 熊伟 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000
云南省昆虫生物医药研发重点实验室, 云南, 大理 671000 |
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| 中文摘要: |
| 采用PCR技术从pGEM-MTERF1重组克隆载体中扩增出人MTERF1基因cDNA的开放阅读框序列，经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后，以pcDNA3.1（+）为真核表达载体，构建重组质粒pcDNA3.1（+）-MTERF1；通过PCR、双酶切和DNA测序方法对重组子进行鉴定；将重组真核表达质粒pcDNA3.1（+）-MTERF1转染C-33A细胞，利用免疫印迹法检测MTERF1蛋白的表达。结果显示，重组质粒pcDNA3.1（+）-MTERF1经双酶切鉴定和菌落PCR鉴定均获得大小为1 200 bp的目的条带，DNA测序结果表明该序列与GenBank中人MTERF1基因序列完全相同，插入基因的大小和方向正确；免疫印迹结果表明，MTERF1蛋白的表达水平在转染pcDNA3.1（+）-MTERF1的C-33A细胞中表达高于转染pcDNA3.1（+）的C-33A细胞。通过对人MTERF1基因的真核表达载体的构建，为进一步研究人MTERF1基因的功能奠定了基础。 |
| 英文摘要: |
| The human MTERF1 open reading frame (ORF) was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from pGEM-MTERF1 recombinant cloning vector. Selecting pcDNA3.1(+) as eukaryotic expression vector, the recombinant products of the pcDNA3.1(+)-MTERF1 were gained after double digestion by restriction enzymes KpnⅠ and XhoⅠ. The recombinant plasmid pcDNA3.1(+)-MTERF1 was identified by colony PCR, dual-enzyme digestion and DNA sequencing. C-33A cells were transfected with the pcDNA3.1(+) and pcDNA3.1(+)-MTERF1 respectively, and the expression of MTERF2 protein was detected by Western blotting. A specific band of 1 200 bp was detected from recombinant plasmid pcDNA3.1(+)-MTERF1 identified by digestion of KpnⅠ and XhoⅠand PCR. DNA sequencing and identification showed that homology between this sequence and the human MTERF1 gene sequence in GenBank was 100%, and the size and the direction of the inserted gene were right. MTERF1 protein expression in C-33A cells transfected with pcDNA3.1(+)-MTERF1 was significantly higher than that in C-33A cells transfected with pcDNA3.1(+). pcDNA3.1(+)-MTERF1 eukaryotic expression vector was successfully constructed and expressed effectively in C-33A cells, which laid a foudation of further research on the function and mechanism of human MTERF1. |
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