| 张晓娟,孙美涛,梅雯,自加吉,杨勇琴,熊伟.人MiTERF3基因启动子的克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建[J].井冈山大学自然版,2017,(1):40-44 |
| 人MiTERF3基因启动子的克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建 |
| CLONING OF HUMAN MiTERF3 PROMOTER REGION AND CONSTRUCTION OF THE LUCIFERASE REPORTER GENE VECTORS CONTAINING HUMAN MiTERF3 PROMOTER |
| 投稿时间：2016-07-20 修订日期：2016-09-19 |
| DOI：10.3969/j.issn.1674-8085.2017.01.008 |
| 中文关键词: 人MiTERF3 启动子 报告基因 荧光素酶 载体 |
| 英文关键词: human MiTERF3 gene promoter reporter gene luciferase vector |
| 基金项目:国家自然科学基金项目（81560458，31601155）；云南省教育厅科学研究基金重点项目（2014Z126）；大理大学博士科研启动基金项目（BSKY2012018）；大理大学大学生创新创业训练计划项目（201628） |
| 作者 | 单位 | E-mail | | 张晓娟 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000
大理市第一人民医院呼吸内科, 云南, 大理 671000 | | | 孙美涛 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000 | | | 梅雯 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000 | | | 自加吉 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000 | | | 杨勇琴 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000 | | | 熊伟 | 大理大学基础医学院, 云南, 大理 671000
云南省昆虫生物医药研发重点实验室, 云南, 大理 671000 | xwailp@163.com |
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| 中文摘要: |
| 人MiTERF3基因编码线粒体基因转录和能量代谢的负调控因子。采用PCR技术对人MiTERF3基因5'侧翼上游1251 bp启动子序列进行扩增，并将其克隆至荧光素酶表达载体pGL6-TA，构建人MiTERF3基因启动子荧光素酶报告基因质粒。经酶切、测序鉴定后，将其用脂质体转染体外培养的HEK293细胞株，利用双荧光素酶测定系统检测其表达活性。研究结果表明，克隆获得的1251 bp DNA序列与GenBank报道的一致，且插入方向正确。含人MiTERF3基因启动子的报告基因荧光素酶的表达活性显著提高（P<0.05），约为对照组（空载体pGL6-TA）的9.8倍。本研究通过对人MiTERF3基因启动子的克隆及其荧光素酶表达载体构建与表达活性的测定，为进一步阐明人MiTERF3基因表达的调控机制奠定实验基础。 |
| 英文摘要: |
| Human mitochondrial transcription termination factor 3 (MiTERF3) protein is a negative regulator of human mitochondrial gene expression and energy metabolism. Human MiTERF3 gene was amplified with the human genome by PCR, the segment was cloned into the eukaryotic expression vector pGL6-TA. Therecombinant was detected by endonuclease and sequenced. Plasmid pGL6-MiTERF3-promoter was transfectedinto HEK293 cells by lipofectamine 2000. The activity of luciferase was detected, and the effect of the human MiTERF3 promoter was studied. The sequenced segment (1251bp) in the recombinants was identical to that reported in GenBank and the segment was inserted in right direction. The dual-luciferase analysis results showedthat the human MiTERF3 promoter containing 1251bp fragment had the high transcriptional activity in HEK293cells transfected with the recombinant plasmid, which were about 9.8 times of those in negative control group(empty vector pGL6-TA). The luciferase reporter gene vector with human MiTERF3 promoters of 1251bp hasbeen constructed successfully, which lay a foundation of further study on the regulation of the human MiTERF3gene expression. |
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